Микроклональное размножения голубики
специалистов привлекают растения, до сих пор были мало распространены в культуре , к которым относится и
голубика ( Vaccinium sp . ) . Вкусовые и лечебные свойства ее плодов и листьев , а также тот факт , что
она растет на заболоченных кислых почвах , непригодных для выращивания других
сельскохозяйственно ценных растений , делает голубику привлекательной для промышленного и
любительского садоводства . По нашему мнению , в ближайшее время она будет значительный спрос в
отечественных садоводов. В дикой природе это кустарник 20-120 см высотой с темно -серыми или рыжевато — бурыми
цилиндрическими побегами. Листочки обратно овальные или обратно яйцевидные , жесткие , с
сплошными , несколько загнутыми вниз краями. Цветки бледно — розовые или зеленовато — белые , сидячие ,
размещены в пазухах листьев. Цветет в июне , плоды созревают в июле- августе. ягоды содержат
много сахаристых веществ , аскорбиновой кислоты , витаминов групп В , РР , другие биологически активные вещества, способствующие улучшению усвоения глюкозы тканями организма и могут
использоваться как вспомогательное средство при лечении сахарного диабета.
Садовая высокорослая голубика ( Vaccinium corymbosum L. ) происходит из Северной Америки , где
ее культивируют на промышленных плантациях и приусадебных участках . В северных штатах и в
Канаде это растение популярнее черную смородину благодаря вкусным и привлекательным ягодам .
Она достигает двух метров высотой , за что и получила свое название. Цветет и плодоносит на
третий год после посадки . Диаметр плодов составляет 10-25 мм. Урожайность возрастает с каждым
следующим годом культивирования , достигая максимума ( 10 кг с куста) на шестой -восьмой
года. При надлежащем уходе кусты не теряют производительности в течение 15-20 лет.
Для культивирования в условиях Украины пригодны не все зарубежные сорта , а только раннего
( Блур , Блуетта , Патриот , Спартан и др. . ) И среднего ( Блукроп , Рубел , Нортленд т.д. )
сроков созревания. Позднеспелые сорта созревают лишь на 30 %. Обычно кусты высокорослого
голубики самоплидни , но совокупные посадки двух или более сортов с разными сроками созревания
удлиняют сезон сбора урожая и способствуют быстрому созреванию и увеличению размера
ягод.
Лучше эта культура растет на открытых , хорошо освещенных местах на торфо — песчаных
почвах , рН 4,5-5,0 , с должным аэрацией .
Корневая система голубики находится в верхнем слое почвы , на глубине до 15 см.
Корни волокнистые , чувствительны к уплотнению почвы и избыточного увлажнения . оптимальный для
культивирования уровень стояния грунтовых вод — 40-60 см от поверхности. Растения чувствительны к
ежегодного мульчирование торфом слоем до 5 см , внесение азотных удобрений и поливов. голубика
хорошо реагирует на ежегодное ранневесеннее формирования куста : вырезку старых ветвей на уровне
поверхности почвы , санитарная обрезка , омоложение в кроне . Размножается семенами и
вегетативно : зелеными и одревесневшими черенками , а также делением корневища . корнесобственные
саженцы вступают в плодоношение на четвертый , а сеянцы — на седьмой- восьмой год посадки .
Для повышения объемов производства и качества посадочного материала ценных сортов голубики
следует использовать новые высокоэффективные технологии , среди которых значительное место принадлежит
микроклональное размножению . Эффективность методов in vitro при выращивании оздоровленных
саженцев все чаще рассматривают как серьезную альтернативу традиционным технологиям
размножения.
Методика . Клональное микроразмножение включает изъятие эксплантов ,
культивирования их на питательной среде с последующим субкультивированием до получения
микропагонив ( пролиферация ) , укоренения in vitro и адаптацию укоренившихся микропагонив в
почвенном субстрате. Исследования проводили в лаборатории вирусологии Института садоводства УААН в 2004 —
2007 По соответствием помологическая признакам , отсутствием симптомов бактериальных и
вирусных болезней и карантинных объектов в ОАО » Плодоразсадницкое » ( с.Петровское Киевской
обл.) было отобрано выходные маточные кусты голубики раннеспелого сорта Блуетта . Нодальни
экспланты из них использовались для получения асептической культуры .
Верхушечные и латеральные почки с однолетних кустов стерилизовали по следующей схеме:
70 % -й этанол — 30 сек. , Стерильная дистиллированная вода — сполоснуть , 0,1 % -й HgCl2 — 2 мин . ,
трехкратная промывка в стерильной дистиллированной воде — по 15 мин . латеральные почки
культивировали в стеклянных стаканах ( 190 х 20 мм) , содержащих по 7 мл среды WPM ,
витамины согласно Мурашиге и Скугом ( MS) , 3% сахарозы , 0,6 % -й агар , рН 5,2 . Через 15 дней
инфицированные и некротизированные экспланты видбраковувалы , а те , что прижились , пересаживали на
питательную среду для размножения.
Все среды стерилизовали автоклавированием при 1200С и 98 кРа в течение 20 минут .
Микропагоны культивировали в световой комнате при температуре воздуха 250
С , 16- часовом
фотопериоде с интенсивностью освещения 1,5 тыс. люкс.
Результаты исследований . При введении в асептическую культуру эксплантов голубики
оказалось , что латеральные почки были более продуктивными , чем апикальные — стерилизации
эффект составлял 70-85 % против 33-41 . Подобный эффект был описан для голубики узколистной
( V.angustifolium Ait . ) [ 2 ] . Лучший срок для введения эксплантов в культуру — апрель- май.
В настоящее время природные цитокинины переходят в активную форму. Это способствует нормальному развитию
высаженных эксплантов .
Для разработки технологического звена пролиферации микропагонив голубики в культуре in vitro
проведено исследование влияния минеральной и гормональной составляющих питательной среды .
Тестировали среды MS [ 3] , WPM [4] и Андерсона [ 5 ] , что отличались по минеральным
составом. Наиболее активное побегообразования наблюдали на WPM , содержащее мезоинозит
( 100 мг / л) , сульфат аденина ( 80 мг / л) , витамины согласно MS , 3% сахарозы , 0,6 % агара , рН 5,0-5,2 .
Эта среда была выбрана нами базовым для исследования оптимального
гормонального влияния на пролиферацию микропагонив голубики . для стимуляции
пагоноутворенння испытывали зеатин и 2иР ( N-(3 — метил -2 — бутенил ) -1Н — пурин -6- амин ) в
различных концентрациях при постоянном содержании ИУК ( индолилоцтова кислота) (0,4 мг / л). изучали влияние
зеатин в концентрациях 4 мг / л , 2 мг / л и 1 мг / л и 2иР в концентрациях 2 мг / л , 5 мг / л и 10 мг / л.
Оптимальным для пролиферации побегов голубики оказалось среду WPM , содержащей 2 мг / л
зеатин или 10 мг / л 2иР — коэффициент размножения составил 5,3-8,1 соответственно. подобные
результаты получены в опытах с брусникой ( Vaccinium vitis — idaea L. ) [1 ] . эффективность зеатин
при инициации побегообразования и последующей пролиферации хорошо задокументирована [ 6 ] , но в наших исследованиях в присутствии этого цитокинина наблюдалась недостаточная элонгация
побегов — 0,6 см на среде с зеатин против 1,7 см на среде с 2 — Ир. подобный эффект
описывает Гонсалес с соавторами [ 7 ] . Эти же авторы показали факт оздоровления голубики от
комплекса грибной инфекции путем микроклонування — регенерантов из исходных растений ,
пораженных фитофторозом и фузариозом , по результатам тестирования показали отсутствие
контаминации .
Для укоренения микропагонив голубики использовали среду WPM , содержащее
ИМК ( индолил масляная кислота). Тестировали влияние ряда концентраций ( 0,5 мг / л , 1,0 мг / л , 2,0 мг / л)
этого ауксина на стимулирование ризогенезу . В течение 1,5 месяца внедрялось до 75 %
микропагонив на среде с 0,5 мг / л ИМК , 64 % — при использовании ИМК в концентрации 1,0
мг / л и 41 % при 2,0 мг / л ИМК .
Адаптация укоренившихся микропагонив высотой 1см и более условиям in vivo проводилась
согласно методике , отработанной для ягодных культур ( почвенная смесь — торф : перлит ( 1:1).
Относительная влажность воздуха — 80 % в первые дни адаптации с постепенным понижением до 60 % ,
температура 200С. Полная адаптация происходила в течение 45-50 дней , потери материала при
этом составляли 17-23 %.
Мы предлагаем простую методику микроклонального размножения голубики . поскольку
размножения и элонгация микропагонив происходят одновременно , сокращаются время и затраты на
получения достаточного количества оздоровленного посадочного материала.
Выводы . В результате исследований было установлено :
для инициации асептической культуры голубики высокорослой более пригодны латеральные почки
однолетних растений;
лучший срок для введения эксплантов в культуру in vitro — апрель- май;
оптимальным для пролиферации являются питательную среду WPM , содержащий 10 мг / л 2иР ;
индуктором ризогенезу голубики служит ИМК в концентрации 0,5 мг / л.
Использование метода микроклонального размножения в садоводстве имеет большое
практическое значение для производства оздоровленного посадочного материала , в свою очередь ,
способствует повышению производительности маточных и плодоносящих насаждений. В Украине не
проводятся работы по микроклональное размножению высокорослого голубики , и ограничены ее
промышленные насаждения ( около 20 га ) . Размножение голубики в культуре in vitro позволит
ускорить внедрение ее в промышленное производство .
