Микрометод, определения, аминного азота медным способом
Принцип метода. Этот микрометод определения аминного азота
медным способом был разработан Войвудом и модифицированный
Т.А. Глаголева. Принцип метода заключается в том, что аминокислоты
реагируют с солями меди с образованием растворимого медного комплекса.
Избыток меди удаляют из раствора и определяют содержание меди в
растворе или йодометрическим методом, или с помощью
диетилдитиокарбомату натрия, количественно раскладывает медные соединения
аминокислот, давая при этом желтую окраску. оптическую плотность
окрашенного раствора определяют колориметрически. линейная
зависимость между содержанием большинства аминокислот наблюдается в
пределах от 1 до 30 микрограммов аминного азота.
Оборудование и реактивы Весы технохимические, фарфоровая ступка с
пестиком, штатив с пробирками, лейка, фильтр, химический стакан,
мерные цилиндры, колбы мерные на 1 л, 500 и 100 мл, пипетки градуированные,
пробирки градуированные, стеклянные палочки, водяная баня, центрифуга, ФЭК,
2,73%-ный раствор хлорида меди (II), 2,56%-ный раствор
фосфат натрия (25,6 г Na2HPO4 растворить в воде и довести
объем до 1 л), 1 н раствор гидроксида натрия, 2%-ный раствор
диетилдитиокарбомату натрия, амиловый или бутиловый спирт, 50% —
ой и 2%-ный растворы трихлоруксусной кислоты, дистиллированная вода,
растительный материал.
Ход работы. Навеску свежих листьев или других вегетативных
органов растений массой 5-10 г зафиксировать кипящим амиловым или 70
бутиловым спиртом и тщательно растереть в ступке. затем навеску
перенести в химический стакан на 100 мл. Ступку смыть небольшими
порциями воды (общий объем суспензии в стакане не должен
превышать 40 мл). Стакан с суспензией нагревать на кипящей
водяной бане в течение 1 час.
При анализе муки взять навеску около 5 г, перенести ее в
химический стакан, залить 40 мл воды, тщательно перемешать и
выдержать на водяной бане при 40-500 С в течение 1 час., периодически
помешивая стеклянной палочкой.
Затем провести осаждения белков добавлением в химический стакан
5 мл 50%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. содержимое стакана
отфильтровать в мерную колбу на 100 мл, осадок на фильтре промыть
20 мл 2%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, содержимое колбы доказать
водой до метки и перемешать.
В пробирку внести 1 мл исследуемого раствора, содержащего 10 —
60 мкг аминного азота, добавить 2,5 мл раствора фосфат
натрия и 2,5 мл суспензии фосфорнокислой меди. параллельно
приготовить контрольную пробу, в которой в пробирку вместо
исследуемого раствора добавить 1 мл воды. суспензию фосфорнокислой
меди получить следующим образом. Сначала готовят раствор
ортофосфата натрия (Na3PO4), для чего растворить 25,6 г Na2HPO4 в
500 мл дистиллированной воды, добавить 180 мл 1 н раствора NaОН и доказать
объем водой до 1 л. К одному объема полученного раствора Na3PO4
добавить один объем раствора хлорида меди (II) (27,3 г CuCl2 растворить в
1 л) и смесь хорошо перемешать. После этого долить четыре объемы
2,56%-ного раствора Na2HPO4 и нагревать с обратным холодильником
в течение часа. Суспензию фосфорнокислой меди необходимо готовить
не менее чем за 24 часов. к ее использованию; срок хранения 1-2 месяца.
После добавления суспензии фосфорнокислой меди смесь в пробирках
хорошо взболтать и оставить на 30 мин. (за это время проходит реакция
между медью и аминокислотами). Затем удалить остаток меди. для
этого жидкость отфильтровать через плотный фильтр чистую сухую
пробирку или видцентрифугуваты при 10 тыс. об. / мин. в течение 15 мин.,
что обеспечивает полное удаление из раствора следов осадка
фосфорнокислой меди, которая может повлиять на результаты.
После удаления меди половину фильтрата или 3 мл надосадочной
жидкости перенести в градуированную пробирку. Жидкость в пробирке долить
водой до 8 мл, добавить 0,1 мл 2%-го раствора диетилдитиокарбомату 71
натрия, довести водой до 10 мл и хорошо перемешать. при этом
появляется желтое окрашивание.
После 10-минутного выдерживания соединение, дает желтое
окраски, экстрагировать 10 мл амилового или бутилового спирта.
Смесь видцентрифугуваты при 10 тыс. об. / Мин. в течение 15 мин. и
оптическую плотность полученного желтого раствора определить на ФЕКу с
синим светофильтром. Параллельно определить оптическую плотность
контрольной пробы, в которой вместо раствора исследуемого была
пролить вода.
Содержание аминного азота определить по найденной величине
оптической плотности, используя калибровочную кривую.
При расчетах величину оптической плотности контрольного
раствора вычитают из величины оптической плотности исследуемого
раствора. Здесь вы сможете купить штатив для пробирок по выгодным для вас ценам.